Методы выделения и изучения грибов

Нами проводилось изучение в различных аспектах микофлоры прибрежных районов таких акваторий, как Черное, Балтийское, Белое и Баренцево моря.

Материалом для исследования служили образцы биотопов воды и грунта с различных горизонтов, макрофитов, а также некоторых донных.

Во всех вышеуказанных акваториях пробы воды с поверхности и у берега отбирали непосредственно стерильной склянкой, а у дна н из водной толщи — с борта судна батометром Нансена или винипластовым батометром емкостью 8 л.

Грунт и макрофиты поднимали драгой. Из каждой драги брали только одну пробу грунта из середины, которую сразу переносили в стерилизованных закручивающихся крышках.

Небольшие талломы водорослей помещали в пробирки со стерильной морской водой.

Пробы на большой глубине у самого дна отбирали аквалангисты. Отобранные пробы засевали сразу по возвращении с моря или на следующие сутки. В этом случае склянки с материалом хранили в холодильнике.

Отобранные образцы засевали на агарнзованные питательные среды, разлитые в чашки Петри.

Для выращивания грибов в чашках использовались следующие агарнзованные среды:

1) сусловый агар 2—3% по Баллингу (200 мл неохмеленного пивного сусла 14° по Баллингу, 800 мл профильтрованной морской воды, 20 г промытого агар-агара):

2) голодный агар (морская вода +2% агар-агара);

3) синтетическая среда Чапека на морской воде (агар-агара 2%).

4) мальтозо-пептонный агар на морской воде следующего состава: мальтозы — 3 г; пептона — 2 г; агар-агара — 20 г; морской воды 1 л;

5) синтетическая среда Вишняк.

Все среды стерилизовали 30 мин при 0,5 атм.

Параллельное применением натуральной морской воды для изготовления жидких лабораторных питательных сред Крисс использовал метод концентрации водных проб с помощью микробных фильтров Согласно этой методике после фильтрации фильтры раскладывали на поверхность агаризованной среды («проращивание») или тщательным взбалтыванием смывали малым количеством бульона (5 мл) осевшие на фильтре микроорганизмы, после чего этот бульон смешивали в чашке Петри с расплавленной и охлажденной питательной средой (метод «разливок»).

Метод концентрации воды, по Криссу (1959), нами был несколько модифицирован. Наша модификация заключается в том, что после фильтрации 40 мл волы фильтры помещали в чашки Петри, содержащие стерильную «приманку» и 15-20 мл морской воды из той же пробы, но не фильтрованной. Таким путем нам удавалось на одной чашке Петри за один раз испытать 55—60 мл водной пробы. В этом случае мы совместили метод проращивания» с методом «приманок».

Предварительные опыты, проведенные с использованием всех вышеописанных сред и метода «приманок», показали нам, что наиболее перспективной средой для выделения гифомицетов является агаризованное сусло. На агаризованной морской воле, среде Чапека и мальтозо-пептонном агаре было меньшее количество колоний на чашке и менее разнообразный видовой состав, чем на сусловом агаре.

На синтетической среде Вишняк рост гифомицетов был таким же, как на агаризованном сусле, и по количеству, и в отношении разнообразия форм.

Учитывая значительную трудность приготовления среды Вишняк, сложность н нестандартность входящих в нее компонентов, а также то, что низшие грибы на ней не росли или же росли крайне редко и скудно, мы все дальнейшие исследования проводили с использованием сусло-агара.